ACE色譜柱是高性能液相色譜柱,廣泛應(yīng)用于藥物分析、環(huán)境檢測、食品安全、生物化學(xué)及科研等領(lǐng)域。ACE色譜柱以其z越的分離效率、高重現(xiàn)性和優(yōu)異的批次間一致性而受到全球用戶的高度認(rèn)可。采用先進(jìn)的封端工藝和雙齒鍵合技術(shù),顯著提高了固定相在j端pH條件下的穩(wěn)定性(pH 1–12),延長了柱壽命,并減少了堿性化合物的拖尾現(xiàn)象。此外,ACE UltraCore系列采用核殼(core-shell)顆粒技術(shù),在保持高柱效的同時(shí)降低背壓,適用于UHPLC和HPLC系統(tǒng),實(shí)現(xiàn)快速、高效分離。
一、使用前的準(zhǔn)備與安裝
1、確認(rèn)兼容性
檢查色譜柱說明書,明確其耐受的pH范圍(如C18柱通常為2-8)、溫度范圍(多數(shù)≤60°C)和最大壓力,避免超范圍使用。
避免直接使用與柱內(nèi)保存溶劑(如甲醇、乙腈)互溶性差的流動(dòng)相(如緩沖鹽溶液),防止鹽析出或溶劑混合放熱損傷固定相。
2、正確安裝與沖洗
連接色譜柱時(shí),確保管線接口無顆粒雜質(zhì),手?jǐn)Q接頭至輕微阻力后,再用扳手固定1/4圈,避免漏液或死體積過大。
新柱活化:用低流速(0.3-0.5 mL/min)的初始流動(dòng)相(如反相柱用10%甲醇水)沖洗30-60分鐘,逐步升高流速至目標(biāo)值,避免驟變沖擊柱床。
舊柱重啟:長期閑置的色譜柱,先用保存溶劑(如純乙腈)沖洗至基線平穩(wěn),再用分析流動(dòng)相平衡。
二、使用中的操作規(guī)范
1、流動(dòng)相管理
緩沖鹽使用:
梯度洗脫時(shí),有機(jī)溶劑比例需緩慢升高(每次增加≤10%),并在每個(gè)梯度后保持5-10分鐘穩(wěn)定流速,防止鹽析出。
混合流動(dòng)相時(shí),先將水相(含緩沖鹽)與有機(jī)相分別過濾,再按比例混合,避免局部濃度過高。
緩沖液需現(xiàn)配現(xiàn)用,存放不超過3天,避免微生物繁殖或成分降解(可添加0.02%疊氮h鈉抑菌)。
流動(dòng)相過濾與脫氣:所有流動(dòng)相(尤其是水相)需經(jīng)0.45μm濾膜過濾,并采用在線脫氣或超聲脫氣(20分鐘),避免氣泡進(jìn)入色譜柱導(dǎo)致柱效下降或基線波動(dòng)。
2、樣品預(yù)處理
生物樣品(如血清、細(xì)胞裂解液)需經(jīng)離心(10000 rpm,10分鐘)+0.22μm濾膜過濾,去除蛋白、細(xì)胞碎片等雜質(zhì)。
化學(xué)樣品若含鹽或高濃度有機(jī)物,可用固相萃取(SPE)或稀釋法降低基質(zhì)干擾。
3、操作條件控制
避免流動(dòng)相組成及極性的劇烈變化,防止固定相塌陷或柱效下降。
柱溫不超過色譜柱的溫度使用范圍,高溫分析后需緩慢降至室溫再?zèng)_洗,避免熱脹冷縮導(dǎo)致柱床結(jié)構(gòu)破壞。
三、使用后的清洗與保存
1、日常清洗
緩沖鹽體系:
立即沖洗:分析結(jié)束后,先用高水相流動(dòng)相(如95%水+5%有機(jī)相)以1 mL/min流速?zèng)_洗30-60分鐘,徹d置換出柱內(nèi)緩沖鹽。
有機(jī)溶劑過渡:再用純有機(jī)相(乙腈或甲醇)沖洗20-30分鐘,去除疏水雜質(zhì),防止長期殘留滋生微生物。
特殊污染清洗:
蛋白殘留:用0.1 M NaOH溶液或含10%乙腈的0.1%甲酸溶液沖洗,再用純水和有機(jī)相沖洗。
金屬離子污染:反相柱可用10 mM EDTA水溶液沖洗,絡(luò)合金屬離子后再用水和有機(jī)相清洗。
強(qiáng)保留物質(zhì):用強(qiáng)洗脫溶劑(如s氫呋喃、二甲基亞砜)以低流速(0.2-0.5 mL/min)沖洗,每次10-15分鐘,重復(fù)2-3次。
2、長期保存
反相柱:充滿純乙腈或甲醇(防腐、防干柱),兩端密封,垂直存放于陰涼處(避免陽光直射)。
正相柱:充滿正己烷-異丙醇(9:1)混合溶劑,防止固定相干裂。
離子交換柱:用20%乙醇水溶液保存,抑制微生物生長,避免鹽結(jié)晶。
四、日常維護(hù)與故障排查
1、定期檢測柱效
每周用標(biāo)準(zhǔn)樣品(如甲苯、萘)測試柱效,記錄理論塔板數(shù)(N)和對(duì)稱因子(As)。若N下降≥20%或As>1.5,提示柱效下降,需及時(shí)清洗或再生。
2、柱頭污染處理
若柱壓升高但柱效未顯著下降,可能是柱頭篩板堵塞。可小心卸下柱頭螺絲,用鑷子取出篩板,超聲清洗(純水→甲醇,各15分鐘)后裝回,或更換新篩板。
3、避免極d操作
禁止流動(dòng)相長時(shí)間停流(如超過2小時(shí)),防止固定相干縮或樣品擴(kuò)散至柱床深層。
